Пресс-центр / новости / Наука /
Информация о ходе выполнения проекта Минобрнауки России по Соглашению № 14.607.21.0062 о предоставлении субсидии от 23 сентября 2014 г.
Тема проекта: «Создание терапевтических бифункциональных агентов на основе одноцепочечных антител для элиминации раковых стволовых клеток и предотвращения рецидивов опухолей».
За отчетный период 4-го этапа в рамках выполнения соглашения были проведены следующие работы:
- получены фракции раковых стволовых клеток острого миелоидного лейкоза;
- проведены оценка терапевтического потенциала полученных фрагментов антител в отношении РСК острого миелоидного лейкоза и сравнение с активностью на стволовых клетках рака молочной железы;
- проведено секвенирование транскриптомов РСК-плюс и РСК-минус клеточных субпопуляций и определение дифференциально экспрессирующихся генов, характерных для РСК-плюс фракций;
- получены фракции раковых стволовых клеток из резекционного материала пациенток с опухолью молочной железы;
- проведена оценка терапевтического потенциала полученных фрагментов антител на раковых стволовых клетках, выделенных из резекционного материала пациенток;
- проведен поиск оптимальной пары фрагментов VHH-антител для создания бифункционального противоопухолевого агента, обладающего наиболее выраженным действием в отношении РСК;
- определена оптимальная длина пептидного линкера, соединяющего фрагменты одноцепочечных антител и обеспечивающего одновременный контакт биспецифичного агента с обоими поверхностными рецепторами;
- проведена пробоподготовка для секвенирования транскриптомов;
- измерена аффинность фрагментов VHH-антител в составе бифункциональных агентов методом поверхностного плазмонного резонанса.
В результате выполнения работ четвертого этапа работ по Соглашению № 14.607.21.0062 о предоставлении субсидии получены нижеследующие основные результаты.
- Поставлена серия экспериментов для оценки терапевтического потенциала фрагментов одноцепочечных антител против опухолевых рецепторов в отношении раковых стволовых клеток острого миелоидного лейкоза (ОМЛ). Из линий ОМЛ выделены стволовые клетки, протестирована их туморогенность, подтвержена принадлежность к стволовому фенотипу, после чего РСК ОМЛ были использованы в качестве мишеней для тестируемых фрагментов одноцепочечных антител. Было установлено, что анти-CD44 и анти-CD47 антитела, полученные и протестированные в ходе предыдущих этапов выполнения проекта, оказывают ингибирующее влияние на рост РСК ОМЛ, причем такое влияние по силе несколько превосходит ингибирующий эффект, наблюдавшийся в отношении РСК рака молочной железы (РМЖ). Анти-ERBB2 и анти-Notch1 фрагменты антител не показали ингибирующего действия в отношении РСК ОМЛ.
- С целью идентификации потенциальных новых молекулярных мишеней для терапии ОМЛ было проведено дифференциальное секвенирование транскриптомов РСК-плюс и РСК-минус фракций клеточных линий ОМЛ.
- В продолжение тестирования фрагментов одноцепочечных антител, их действие было протестировано на фракциях РСК РМЖ из первичных культур опухолевых клеток, полученных из резекционного материала. Был зафиксирован стойкий ингибирующий эффект в случае применения анти-ERBB2 и анти-CD44 антител, а также умеренный эффект от применения анти-CD47 антител.
- Осуществлен поиск оптимальной пары фрагментов антител с целью создания эффективного терапевтического бифункционального агента, для чего создана серия экспрессирующих конструкций с различными вариантами спаренных фрагментов, соединенных пептидными линкерами различной длины.
- Проведена оценка взаимного влияния фрагментов антител в составе потенциального бифункционального агента, определена длина линкера, сводящего к минимуму стерические взаимодействия фрагментов антител, а также отобраны пары-кандидаты для создания бифункционального агента.
Проект выполняется в Группе экспрессии белковых факторов роста и дифференцировки ИБХ РАН.
8 июля 2016 года