Пресс-центр / новости / Наука /
Информация о ходе выполнения проекта Минобрнауки России по Соглашению о предоставлении субсидии № 14.607.21.0140 от 27 октября 2015 г. по теме «Создание персонифицированных препаратов на основе цитотоксических Т-лимфоцитов и дендритно-клеточных вакцин для профилактики и терапии рецидивов злокачественных новообразований»
Этап №3 (заключительный) проекта Минобрнауки по соглашению о предоставлении субсидии № 14.607.21.0140 от 27.10.2015 г.
В ходе реализации проекта «Создание персонифицированных препаратов на основе цитотоксических Т-лимфоцитов и дендритно-клеточных вакцин для профилактики и терапии рецидивов злокачественных новообразований» по Соглашению о предоставлении субсидии № 14.607.21.0140 от 27.10.2015 г. Минобрнауки России в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014-2020 годы» на 3 этапе работы в период с 1 января по 31 декабря 2017 года были выполнены следующие работы:
1. Проведены постактивационные модификации цитотоксических Т- лимфоцитов для усиления их противоопухолевого действия.
2. Получена экспрессионная конструкция для белка апоптина, содержащая различные сигнальные последовательности и осуществлена его экспрессия в Т-лимфоцитах.
3. Разработан подход по выявлению опухолеспецифичных антигенов при помощи результатов глубокого секвенирования транскриптома или высокопроизводительной масс-спектрометрии.
4. Проведено тестирование цитотоксических Т-лимфоцитов на отобранных опухолевых антигенах.
5. Разработана схема получения активированных Т-лимфоцитов и их последующей сепарации с дендритными клетками на основе микросфер с аффинным покрытием.
6. Проведены медико-биологические исследования in vitro и in vivo с учетом возможности использования клеточных препаратов в режиме терапевтической и профилактической схем терапии опухолей.
7. Произведена оценка полноты решения задачи и достижения поставленных целей ПНИЭР.
8. Разработаны рекомендации по возможности использования результатов проведенных ПНИЭР в реальном секторе экономики.
9. Разработан проект технического задания на проведение ОТР по теме: «Разработка технологии получения активированных Т-лимфоцитов в полупромышленных количествах».
10.Синтезированы последовательности, кодирующие сигнальные пептиды для секреции и трансдукции рекомбинантного апоптина.
11. Произведены поставки антител и флуоресцентных зондов для Flow-FISH против антигенов, отобранных после масс-спектрометрии и секвенирования транскриптома.
12. Организовано производство микросфер с аффинным покрытием для иммобилизации дендритных клеток.
При этом были получены следующие основные результаты:
Усиление противоопухолевого потенциала цитотоксических Т- лимфоцитов было достигнуто путем генетической модификации клеток, направленной на экспрессию опухольспецифического онколитического белка – апоптина. Были синтезированы последовательности, кодирующие сигнальные пептиды для секреции и трансдукции рекомбинантного апоптина и создана лентивирусная экспрессионная конструкция, содержащая ген апоптина. Т.к. эффективность действия апоптина на клетки опухоли напрямую зависит от системы секреции-трансдукции, были также получены лентивирусные конструкции, содержащие наиболее эффективные сигналы секреции: Gaussia и HMMsp38. В качестве сигнала трансдукции использовалась последовательность трансактиватора транскрипции вируса иммунодефицита человека (HIV1) – TAT. Показано, что апоптин под контролем сигнального пептида люциферазы Gaussia обладает значительно большим секреторным потенциалом по сравнению с химерной последовательностью апоптина под контролем синтетического сигнального пептида HMMsp38. По данным анализа биоинформатического парного секвенирования образцов опухолей молочной железы и нормальной ткани проведен поиск потенциальных опухолеспецифичных антигенов, результаты проверены по базе данных и отобраны пересекающиеся образцы. Для отобранных потенциальных антигенов получены экспрессионные конструкции и использованы для приготовления индуцированных дендритными клетками цитотоксических Т-лимфоцитов. Были разработаны схемы получения активированных Т-лимфоцитов и сепарации дендритными клетками на основе микросфер с аффинным покрытием. Проведены медико- биологические исследования in vitro и in vivo с целью использования клеточных препаратов в терапевтической и профилактической схемах терапии опухолей.
Выполненные работы и полученные результаты полностью соответствуют требованиям Технического задания и Плана-графика Соглашения о предоставлении субсидии № 14.607.21.0140 от 27.10.2015 г.
9 января 2018 года