Биоорганическая химия, 2017, 43(6):620-630

Рекомбинантная продукция и исследование структуры белков человека Lypd6 и Lypd6b

Это дубликат статьи: «Recombinant production and structural studies of the human Lypd6 and Lypd6b proteins»

Белки человека Lypd6 и Lypd6b экспрессируются во многих тканях и имеют высокую степень гомо- логии аминокислотной последовательности (~ 54%). Оба белка в отличие от других белков семейства Ly6/uPAR имеют дополнительные протяженные N- и С-концевые аминокислотные последователь- ности, примыкающие к трехпетельному LU-домену, роль которых на данный момент не изучена. Из- вестно, что Lypd6 увеличивает амплитуду токов кальция, индуцированных никотином в нейронах тройничного нерва мыши. Lypd6 рыбки Danio rerio участвует в регуляции Wnt/β-катенин сигнального каскада, и блокирование экспрессии гена lypd6 приводит к нарушению эмбрионального развития. Экспрессия Lypd6b в ооцитах X. laevis повышает чувствительность никотиновых ацетилхолиновых ре- цепторов к ацетилхолину и увеличивает скорость их десенситизации. Молекулярные механизмы дей- ствия, равно как и пространственная структура Lypd6 и Lypd6b, до сих пор не изучены. В представ- ленной работе получены и экспрессированы гены водорастворимых аналогов трехпетельных белков человека Lypd6 и Lypd6b, не содержащих N-концевые последовательности (rLypd6 и rLypd6b), а также Lypd6 с N-концевой последовательностью – N-rLypd6. Белки получали в виде цитоплазматических телец включения в E. coli с последующей солюбилизацией в денатурирующих условиях и ренатураци- ей. С целью оптимизации выхода рекомбинантных белков был проведен поиск условий ренатурации. Анализ полученных препаратов N-rLypd6, rLypd6 и rLypd6b методами ЯМР-спектроскопии показал, что N-rLypd6, возможно, не структурирован. Получение миллиграммовых количеств изотопно-ме- ченных вариантов rLypd6 и rLypd6b позволило охарактеризовать вторичную структуру этих белков и исследовать внутримолекулярную подвижность. Установлено, что rLypd6 и rLypd6b обладают струк- турными элементами, характерными для трехпетельных белков семейства Ly6/uPAR с некоторыми уникальными особенностями, такими как наличие дополнительной дисульфидной связи в третьей петле и спиральных участков в первой и третьей петлях.

IBCH: 6692
Ссылка на статью в журнале: https://elibrary.ru/item.asp?id=30483068
Нет данных о цитировании
Данные статьи проверены модераторами 2017-01-06