УСИЛЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ХИМЕРНЫХ ГЕНОВ ВКЛЮЧЕНИЕМ В ИХ 3’-НЕТРАНСЛИРУЕМУЮ ОБЛАСТЬ ИНТРОНА 2 ГЕНА БЕТА-ГЛОБИНА ЧЕЛОВЕКА

Исследована возможность увеличения гетерологичной экспрессии в клетках млекопитающих при включении интронов в 3'нетранслируемую область cоответствующего гена. Для этого в экспресси онный вектор, содержащий ген флуоресцентного белка TagGFP2, вводили интрон 2 гена βглобина человека. Данная последовательность встраивалась после стопкодона TagGFP2 на расстоянии 35 нт. от стопкодона до сайта сплайсинга. Это позволило избежать процесса нонсенсопосредован ной деградации мРНК. Использование второй рамки считывания, кодирующей красный флуорес центный белок Katushka, позволило нормировать уровень трансфекции и экспрессии химерных конструкций. Проточная цитофлуориметрия культуры клеток HEK293T, временно трансфициро ванных генетическими конструкциями, содержащими и не содержащими интрон, позволила вы явить увеличение интенсивности флуоресценции в зеленом канале для конструкции с интроном в 1.8 ± 0.2 раза относительно контрольной безинтронной конструкции. Аналогичное усиление уровня экспрессии в 1.7 ± 0.2 раза при наличии интрона 2 βглобина 3'нетранслируемой области было показа но также для гена, кодирующего дестабилизированный вариант флуоресцентного белка TurboYFP. Эффект увеличения уровня экспрессии химерных конструкций в клетках млекопитающих введени ем интрона в 3'нетранслируемую область целевого гена можно использовать в различных модель ных системах, где введение 5'концевого интрона в последовательность является неприемлeмым.

Переверзев АП, Маркина НМ, Янушевич ЮГ, Городничева ТВ, Минасян БЭ, Лукьянов КА, Гурская НГ

IBCH: 6816
Нет данных о цитировании
Информация пока не проверена модераторами