Группа генно-инженерных биофармацевтических технологий

     Основным направлением работы группы генно-инженерных биофармацевтических технологий являются разработка фундаментальных и прикладных аспектов биотехнологии и внедрение результатов в производство биофармацевтических препаратов. В группе осуществляется полный цикл работ в области генной инженерии и белковой химии: от выбора стратегии клонирования индивидуального гена и его химико-ферментативного синтеза до разработки метода выделения, очистки, полной физико-химической идентификации и исследования биологической активности, масштабирования экспрессии и стадии ферментации, а также создания лабораторных и опытно-промышленных регламентов, которые реализуются совместно с Опытным биотехнологическим производством. Особое внимание уделяется разработке биотехнологий получения биологически активных фармацевтических субстанций (АФС) и созданию готовых лекарственных средств (ГЛС) препаратов на основе рекомбинантных белков и пептидов, на базе опытного биотехнологического производства ИБХ РАН.

     Группа, входящая в состав лаборатории биотехнологии, успешно принимает участие в государственных программах: «Фарма 2020», Федеральной космической программе России, грантах Российского Фонда Науки и Российского Фонда Фундаментальных Исследований. Сотрудники группы неоднократные победители конкурса молодых ученых на Московской международной конференции «БИОТЕХНОЛОГИЯ и МЕДИЦИНА», «УМНИК».

       Сотрудники группы обладают большим опытом в создании и дальнейшей верификации широкого круга рекомбинантных препаратов, получаемых в том числе и с помощью технологий белкового сплайсинга. Совместная работа сотрудников группы с опытным биотехнологическим производством ИБХ РАН позволила в кратчайшие сроки организовать получение опытных партий целого ряда потенциальных лекарственных препаратов в рамках государственных контрактов Минпромторга и Минобрнауки для проведения доклинических исследований.

      Большое внимание в группе уделяется работе со школьниками, студентами и аспирантами профильных учебных заведений. Студенты Института тонких химических технологий Московского технологического университета (МТУ), Заяц Евгений Андреевич и Терешин Михаил Николаевич, постоянно и активно работающие в группе генноинженрных биотехнологических технологий, являются призерами нескольких интеллектуальных турниров биологической направленности всероссийского и международного уровня в составе команды «БиоТех» МИТХТ.

1)  IV открытое всероссийское студенческое командное соревнование «Биотурнир 2017» в г. Пущино:
    II место в командном зачете.
Терешин Михаил получил приз «Лучшему игроку турнира».

2018_02_19_16_08_413.png

2)  Международная биологическая универсиада МГУ 2017:
      Командный диплом II степени.

2018_02_19_16_09_174.png

3)  III студенческий биологический турнир МГУ 2018:
      Командный диплом III степени
. Евгений и Михаил также стали победителями в личном первенстве, получив дипломы II степени. Михаил вошел в сборную лучших игроков турнира, получив диплом «Лучшего докладчика и рецензента».

2018_02_19_16_09_405.png

      27 октября 2016 года сотрудники Института биоорганической химии РАН провели экскурсию для участников профориентационного проекта библиотеки им. Н.А. Некрасова «Завтра»

     Одним из главных достижений группы генно-инженерных биофармацевтических технологий совместно с опытным биотехнологическим производством ИБХ является разработка и внедрение отечественной технологии производства активной фармацевтический субстанции (АФС) генно-инженерного глюкагона человека (руководитель – акад. А.И. Мирошников). Реализация проекта была осуществлена в 2012-2015 гг. при поддержке Министерства промышленности и торговли Российской Федерации. Получение АФС привело к разработке готовой лекарственной формы глюкагона – «ГЛЮКОРАН» (глюкагон рекомбинантный, человеческий генноинженерный, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 1 МЕ/мг). Завершение этого проекта позволило подготовить регистрационное досье на производство на базе ОБП ИБХ АФС и лекарственных форм генно-инженерного глюкагона человека.

За время существования группы, под руководством Есипова Романа Станиславовича,  защищено 4 кандидатские и более 25 бакалаврских и магистерских работ.

Фото с защиты кандидатской диссертации Макарова Д.А.

Партнеры:

  • АО «Р-Фарм»
  • Проф. И.П. Куранова – зав. лаборатории кристаллографии белков Институт кристаллографии им. Шубникова РАН
  • К.б.н. С.П. Домогатский – рук. группа инженерной иммунологии ФГБУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс» Минздрав РФ Институт экспериментальной кардиологии
  • Проф. В.С. Акопян – зав. кафедрой офтальмологии Факультет фундаментальной медицины МГУ
  • Проф. М.А.Владимирский – заведующим лаборатории иммунологических исследований и молекулярной диагностики туберкулёза. Научно-исследовательский Институт Физиопульманологии Московской Медицинской Академии им. Сеченова
  • К.б.н. М.Л.Филиппенко – руководитель лаборатории фармакогеномики НИИ Химической биологии и фундаментальной медицины
  • Д.х.н. Ю.С. Скоблов – зав. лаборатории изотопных методов анализа Институт биоорганической химии им. Академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН
  • Проф. С.Н.Михайлов – зав. лаборатории химии нуклеозидов Институт Молекулярной биологии им. Энгельгардта РАН
  • «Научный центр «Сигнал»» (ФГУП НЦ Сигнал)
  • «Научно-исследовательский институт прикладной акустики» (ФГУП НИИПА)

 

 

Генная инженерия и биоорганическая химия:

  1. Создание высокоэффективных штаммов-продуцентов белков, в том числе и ферментов, представляющих интерес, как для медицинской практики, так и для прикладного использования в биотехнологии и белковой инженерии.
  2. Разработка методов получения рекомбинантных белков и пептидов, том числе и с использованием процесса белкового сплайсинга, их пост-трансляционная модификация in vivo и in vitro.
  3. Химические и ферментативные модификации белков, в том числе и пост-трансляционные, изменяющие свойства целевых продуктов.
  4. Кристаллизация ферментов и создание рентгеноструктурных моделей белков. Изучение активного центра ферментов.
  5. Создание препаратов на основе белков и ДНК, ответственных за регенерацию тканей

Промышленная биотехнология:

Создание лабораторных и опытно-промышленных регламентов на производство субстанций рекомбинантных белков (пептидов), в том числе медицинского назначения, решение проблем масштабирования процессов ферментации, выделения и очистки.

 

Препараты медицинского назначения:

  • Разработан биотехнологический подход получения ряда активных фармацевтических субстанций рекомбинантных полипептидов на основе гибридных белков, содержащих тиоредоксин А, целевой полипептид и сайт расщепления гибридного белка TEV протеиназой.
  • Разработан интеин-опосредованный биотехнологический подход получения ряда активных фармацевтических субстанций рекомбинантных полипептидов на основе гибридного белка, содержащего элементы белкового сплайсинга и не требующего применения специфических протеаз.
  • Разработан биотехнологический способ получения рекомбинантных тимозина α1 и тимозина β4 человека, исключающий стадию химического ацетилирования пептида.
  • С использованием разработанных технологических подходов созданы опытно-промышленные технологии получения активных фармацевтических субстанций следующих рекомбинантных полипептидов: тимозин α1, тимозин β4 (Тиморан), глюкагон (Глюкоран), тумстатин (Тумастин), аналоги гирудина (Лепирудин и Дезирудин), эндостатин, сиалированный оксинтомодулин (Оксилонг), модифицированный фрагмент фактора дифференцировки пигментного эпителия (Пигостин), эпидермальный фактор роста, окситоцин, анальгетик АРНС-3 (Пептальгин), анальгетик РТ-1 (Пунальгин).
  • На основе АФС созданы лекарственные средства: «Глюкоран», «Оксилонг», «Пигостин», «Пептальгин», «Тиморан», «Пунальгин».

 

Пример активной фармацевтической субстанции, полученной для проведения доклинических испытаний.

  • Для всех созданных технологий разработаны методы технологического контроля и анализа конечного продукта, включая тестирование биологической активности.
  • Разработана технологическая документация (опытно-промышленные технологические регламенты).
  • Доказана высокая специфическая биологическая активность на клеточных и животных моделях препаратов «Тиморан», «Глюкоран», «Оксилонг», «Пигостин», «Тумстатин», «Лепирудин», «Дезирудин», «Пептальгин» и «Пунальгин».
  • Разработаны лабораторные регламенты получения серии цитокинов, в том числе и в пегилированной форме: интерлейкина 2, интерлейкина 3, инетрлейкин 4, интерлейкина 15, интерлейкин 18, интерферона альфа-2а, интерферона альфа-2в.

Противотуберкулезная тематика:

  1. Получены штамм-продуценты таргетных ферментов Mycobacterium tuberculosis, жизненно важных для деятельности микобактерии и разработаны методы очистки этих ферментов:
  • кислая фосфатаза
  • фосфопантетеин-аденилилтрансфераза
  • Ser/Thr-специфичная протеинкиназа
  • имидазол-глицерол-фосфатдегидратаза
  • аспартат аминотрасфераза AspC
  • кетол-кислотная редуктоизомераза

2. Методом встречной диффузии в капиллярах получены кристаллы микобактериальной фосфопантетеин-аденилилтрансферазы комплексе с субстратами – АТФ, коэнзимомА и с дефосфокоэнзимомА.

kristally_fosfopantetein-adenililtransfe

Кристаллы фосфопантетеин-аденилилтрансферазы M.tuberculosis

3. Методом рентгеноструктурного анализа решена кристаллическая структура микобактериальной фосфопантетеин-аденилилтрансферазы комплексе с субстратами:

-фосфопантетеин-аденилилтрансферазы Mycobacterium Tuberculosis с АТФ

-фосфопантетеин-аденилилтрансферазы Mycobacterium Tuberculosis с коэнзимом А

- фосфопантетеин-аденилилтрансферазы Mycobacterium Tuberculosis с DPCoA

 

4. Создан штамм-продуцент белков культурального фильтрата микобактерий туберкулеза, в семейство которых входит секреторные антигены ESAT-6 и CFP10. Разработаны методы выделения гибридного белка cfp10-esat6.

 

Антитромбиновая тематика (антикоагулянты):

  1. Разработан интеин-опосредованный биотехнологический подход получения рекомбинантных аналогов ряда высокоспецифичных прямых ингибиторов тромбина из кровососущих организмов: аналогов гирудина из медицинской пиявки H. medicinalis, анофелина из малярийного комара Anopheles albimanus, гемадина из Haemadipsa sylvestris и вариегина из тропического клеща Amblyomma variegatum, не требующий применения специфических протеаз.
  2. Проведено комплексное исследование антитромботической активности рекомбинантных антикоагулянтов, включающее: определение антитромботической активности in vitro с помощью амидолитического теста; влияние препаратов на изменение времен свертывания плазмы крови человека (тромбинового, протромбинового и активированного частичного тромбопластинового времен); установлены фармакодинамические эффекты при внутривенном введении мышам линии CD-1. Для исследования специфической антитромботической активности in vivo были использованы модели хвостового кровотечения и венозного тромбоза на фоне гиперкоагуляции на крысах Sprague Dawley. В качестве препаратов сравнения использовали рекомбинантный гирудин-1 (дезирудин), нефракционированный гепарин и дабигатрана этексилат (Pradaxa, Boehringer Ingelheim, Германия).

Ферменты нуклеинового обмена:

  1.  Получены штаммы-продуценты пуриннуклеозид фосфорилазы T.thermophiles, фосфорибозилпирофосфат синтетазы II T.thermophiles, аденинфосфорибозилтрансферазы T.thermophiles, рибокиназы T.sp., рибомутазы T.thermophiles, гипоксантин-гуанин фосфорибозилтрансферазы T.thermophiles, пуриннуклеотид фосфорилазы E.coli, фосфорибозилпирофосфат синтетазы E.coli, тимидин фосфорилазы E.coli, уридин фосфорилазы E.coli, уридин фосфорилазы Salmonella typhimurium, аденозин дезаминазы E.coli, рибокиназы и рибомутазы E.coli.

  2.  Разработаны эффективные методы наработки ферментов нуклеинового обмена в промышленных масштабах.

  3. Предложена новая стратегия биосинтеза биологически важных нуклеозидов, которая состоит в мультиферментном каскадном превращении D-пентоз в пуриновые нуклеозиды. Каскадный синтез включает последовательное превращение в «одной колбе» D-пентоз в 5-фосфаты под действием рибокиназы, из которой затем синтезируется 1-фосфат пептоза под действием рибомутазы, и затем конденсация последних с гетероциклическими основаниями в присутствии пуриновых и пиримидиновых нуклеозид фосфорилаз дает желаемые нуклеозиды.

4.   Предложена новая стратегия биосинтеза биологически важных нуклеотидов, которая состоит в мультиферментном каскадном превращении D-пентоз в пуриновые нуклеотиды. Каскадный синтез включает последовательное превращение в «одной колбе» D-пентоз в 5-фосфаты под действием рибокиназы, из которых затем синтезируются 5-фосфо-α-D-пентофуранозо-1-пирофосфаты под действием фосфорибозилпирофосфатсинтетазы (PRPP-cинтетазы), конденсация последних с гетероциклическими пуриновыми основаниям в присутствии аденинфосфорибозилтрансферазы (APR-трансферазы) дает желаемые нуклеотиды.

kaskad.jpg

5. Методом встречной диффузии в капиллярах получены кристаллы рибокиназы E.coli и T.thermophiles, PRPP-cинтетазы и APR-трансферазы E.coli и T.thermophiles, пуриннуклеозид фосфорилазы E.coli и T.thermophiles, тимидинфосфорилазы E.coli в том числе и с ингибиторами и субстратами

 

Kristall_fosforibozil-pirofosfatsintetaz

Кристалл фосфорибозил-пирофосфатсинтетазы из Thermus thermophilus HB27.

Kristall_purinnukleozid_fosforilazy_E.co

Кристалл пуриннуклеозидфосфорилазы E.coli.

4. Определены субстратные свойства целого ряда ферментов нуклеинового обмена.

5. Методом рентгеноструктурного анализа решены кристаллические структуры следующих ферментов, в том с ингибиторами и субстратами:

  • рибокиназы из T.sp.
  • аденинфосфорибозил транферазы T.thermophiles
  • фосфорибозилпирофосфат синтетазы II из T.thermophiles

  • пуриннуклеотид фосфорилазы E.coli

  • пуриннуклеотид фосфорилазы E.coli с 7-деаза-гипоксантином

  • пуриннуклеотид фосфорилазы E.coli с ациклогуанозином

 

  • Фосфорибозилпирофосфат синтетазы E.coli

  • Тимидин фосфорилазы E.coli

  • Тимидин фосфорилазы E.coli с 3’-азидо-3’-3’-дезокситимидином

  • Тимидин фосфорилазы из E.coli with 3'-азидо-2'-фтор-дидезоксиуридином.

 

 

 

Патенты:

1. Есипов Р.С., Макаров Д. А., Степаненко В. Н., Андреев Я. А., Козлов С. А., Гришин Е. В. Рекомбинантная плазмидная ДНК pER-APHC3, кодирующая гибридный белок, способный к автокаталитическому расщеплению с образованием APHC3, штамм Eschrichia coli C3030/pER-АРНС3 продуцент указанных белков и способ получения рекомбинантного APHC3. Патент РФ № 2619170 от 18.09.2015.

2. Есипов Р.С., Макаров Д.А., Степаненко В.Н., Мирошников А.И. Ковалентный моноконьюгат капроновой кислоты с тимозином бета 4, устойчивый к деградации в токе крови, и способ его получения. Патент РФ № 2604686 от 23.11.2015.

3. Есипов Р.С., Макаров Д.А., Степаненко В.Н., Мирошников А.И. Ковалентный моноконъюгат полисиаловой кислоты с тимозином бета 4, устойчивый к деградации в токе крови, и способ его получения. Патент РФ № 2605385 от 23.11.2015.

4. Есипов Р.С., Макаров Д.А., Степаненко В.Н., Мирошников А.И. Ковалентный моноконьюгат полиэтиленгликоля с тимозином бета 4, устойчивый к деградации в токе крови, и способ его получения. Патент РФ № 2607527 от 23.11.2015.

5. Есипов Р.С., Степаненко В.Н., Макаров Д.А., Мирошников А.И. Рекомбинантная плазмидная ДНК pER-TA1GyrA-AcSer, кодирующая сериновую ацетилтрансферазу, способную in vivo ацетилировать N-концевой серин дезацетилтимозина альфа-1 и гибридный белок, способный к автокаталитическому расщеплению с образованием тимозина альфа-1 человека, штамм-продуцент Eschrichia coli C3030/pER-TA1GyrA–AcSer продуцент указанных белков и способ получения генно-инженерного тимозина альфа-1 человека. Патент РФ № 2593172 от 07.07.2016.

6. Есипов Р.С., Макаров Д.А., Степаненко В.Н., Мирошников А.И. Рекомбинантная плазмидная ДНК pER-TB4GyrA-AcSer, кодирующая сериновую ацетилтрансферазу, способную in vivo ацетилировать N-концевой серин дезацетилтимозина бета 4 и гибридный белок, способный к автокаталитическому расщеплению с образованием тимозина бета 4 человека, штамм-продуцент Eschrichia coli C3030/pER-TB4GyrA–AcSer продуцент указанных белков и способ получения генно-инженерного тимозина бета 4 человека. Патент РФ № 2592860 от 07.07.2016.

7. Есипов Р.С., Степаненко В.Н., Василевский А.А., Королькова Ю.В., Гришин Е.В. Способ получения рекомбинантного анальгетического пептида. Патент РФ на изобретение № 2571942 от 27.11.2015.

8. Есипов Р.С., Степаненко В.Н., Бейрахова К.А., Мирошников А.И., Автушенко С.С., Сурков К.Г., Романов В.Д., Генкин Д.Д. Оксинтомодулин человека, его применение. Лекарственный препарат на его основе и способ применения препарата для лечения и профилактики гипергликемии. Патент РФ на изобретение № 2524204 от 27.07.2014

9. Есипов Р.С., Степаненко В.Н., Костромина М.А., Мирошников А.И., Воробьев А.И., Юрьев А.С. Рекомбинантная плазмидная ДНК pER-Hir, кодирующая гибридный белок, способный к автокаталитическому расщеплению с образованием [Leu1, Thr2]-63-десульфатогирудина, штамм Escherichia coli ER2566/pER-Hir - продуцент указанного белка и способ получения генно-инженерного [Leu1, Thr2]-63-десульфатогирудина. Патент РФ на изобретение № 2435858 от 10.12.11.

Прикладные работы

Мы осуществляем полный цикл работ в области генной инженерии: синтез гена и его клонирование в выбранный вектор, скрининг трансформантов и проверку экспрессии целевого гена, проводим оптимизацию экспрессии и ферментации, масштабирование стадии ферментации (от 250 мл до 200 л) и выделения (1 мг до 10 грамм). Разрабатываем стандартизованный протокол очистки целевого белка.

Избранные публикации

  1. Esipov RS, Stepanenko VN, Zvereva IO, Makarov DA, Kostromina MA, Kostromina TI, Muravyova TI, Miroshnikov AI, Grishin EV (2018). Erratum to: Biotechnological Method for Production of Recombinant Peptide Analgesic (Purotoxin-1) from Geolycosa sp. Spider Poison (Russian Journal of Bioorganic Chemistry, (2018), 44, 1, (32-40), 10.1134/S1068162018010065). Russ. J. Bioorganic Chem. 44 (4), 472
  2. Timofeev VI, Zhukhlistova NE, Abramchik YA, Muravieva TI, Esipov RS, Kuranova IP (2018). Crystal structure of Escherichia coli purine nucleoside phosphorylase complexed with acyclovir. Acta Crystallogr F Struct Biol Commun 74 (7), 402–409
  3. Esipov RS, Makarov DA, Stepanenko VN, Kostromina MA, Muravyova TI, Andreev YA, Dyachenko IA, Kozlov SA, Grishin EV (2018). Pilot production of the recombinant peptide toxin of Heteractis crispa as a potential analgesic by intein-mediated technology. Protein Expr Purif 145 (0), 71–76
  4. Simonova MA, Pivovarov VD, Ryazantsev DY, Kostromina MA, Muravieva TI, Mokronosova MA, Khlgatian SV, Esipov RS, Zavriev SK (2018). Determination of Specific Class E Immunoglobulins to Bet v 1 Birch Allergen by the Immuno-PCR Method. Russ. J. Bioorganic Chem. 44 (2), 217–224
  5. Esipov RS, Stepanenko VN, Zvereva IO, Makarov DA, Kostromina MA, Kostromina TI, Muravyova TI, Miroshnikov AI, Grishin EV (2018). Biotechnological Method for Production of Recombinant Peptide Analgesic (Purotoxin-1) from Geolycosa sp. Spider Poison. Russ. J. Bioorganic Chem. 44 (1), 32–40
  6. Timofeev VI, Zhukhlistova NE, Abramchik YA, Fateev II, Kostromina MA, Muravieva TI, Esipov RS, Kuranova IP (2018). Crystal structure of Escherichia coli purine nucleoside phosphorylase in complex with 7-deazahypoxanthine. Acta Crystallogr F Struct Biol Commun 74 (0), 355–362
  7. Симонова МА, Пивоваров ВД, Рязанцев ДЮ, Костромина МА, Муравьева ТИ, Мокроносова МА, Хлгатьян СВ, Есипов РС, Завриев СК (2018). Определение специфических иммуноглобулинов класса Е к аллергену березы Bet v 1 методом иммуно-ПЦР. 44 (0), 203–211
  8. Denisova AO, Tokunova YA, Fateev IV, Breslav AA, Leonov VN, Dorofeeva EV, Lutonina OI, Muzyka IS, Esipov RS, Kayushin AL, Konstantinova ID, Miroshnikov AI, Stepchenko VA, Mikhailopulo IA (2017). The Chemoenzymatic Synthesis of 2-Chloro- and 2-Fluorocordycepins. Synthesis (Stuttg) 49 (21), 4853–4860
  9. Timofeev VI, Sinitsyna EV, Kostromina MA, Muravieva TI, Makarov DA, Mikheeva OO, Kuranova IP, Esipov RS (2017). Crystal structure of recombinant phosphoribosylpyrophosphate synthetase 2 from Thermus thermophilus HB27 complexed with ADP and sulfate ions. Acta Crystallogr F Struct Biol Commun 73 (6), 369–375
  10. Abramchik YA, Timofeev VI, Muravieva TI, Sinitsyna EV, Esipov RS, Kuranova IP (2017). Crystallization and preliminary X-ray diffraction analysis of recombinant phosphoribosylpyrophosphate synthetase from the Thermophilic thermus thermophilus strain HB27. CRYSTALLOGR REP+ 62 (1), 78–81
  11. Abramchik YA, Timofeev VI, Muravieva TI, Esipov RS, Kuranova IP (2016). Crystallization and preliminary X-ray diffraction study of recombinant ribokinase from Thermus Species 2.9. CRYSTALLOGR REP+ 61 (6), 974–978
  12. Esipov RS, Abramchik YA, Fateev IV, Muravyova TI, Artemova KG, Konstantinova ID, Kuranova IP, Miroshnikov AI (2016). Recombinant phosphoribosyl pyrophosphate synthetases from Thermus thermophilus HB27: Isolation and properties. Russ. J. Bioorganic Chem. 42 (5), 512–521
  13. Esipov RS, Makarov DA, Stepanenko VN, Miroshnikov AI (2016). Development of the intein-mediated method for production of recombinant thymosin β4 from the acetylated in vivo fusion protein. J Biotechnol 228 (0), 73–81
  14. Esipov RS, Abramchik YA, Fateev IV, Konstantinova ID, Kostromina MA, Muravyova TI, Artemova KG, Miroshnikov AI (2016). A Cascade of Thermophilic Enzymes As an Approach to the Synthesis of Modified Nucleotides. Acta Naturae 8 (4), 82–90
  15. Timofeev VI, Abramchik YA, Zhukhlistova NE, Muravieva TI, Esipov RS, Kuranova IP (2016). Three-dimensional structure of E. Coli purine nucleoside phosphorylase at 0.99 Å resolution. CRYSTALLOGR REP+ 61 (2), 249–257
  16. Eletskaya BZ, Konstantinova ID, Paramonov AS, Esipov RS, Gruzdev DA, Vigorov AY, Levit GL, Miroshnikov AI, Krasnov VP, Charushin VN (2016). Chemoenzymatic arabinosylation of 2-aminopurines bearing the chiral fragment of 7,8-difluoro-3-methyl-3,4-dihydro-2H-[1,4]benzoxazines. MENDELEEV COMMUN 26 (1), 6–8
  17. Макаров ДА, Есипов РС (2016). Разработка способов получения аналогов тимозин-бета 4 в виде коньюгатов, устойчивых к деградации в токе крови. 32 (2), 57–71
  18. Timofeev VI, Abramchik YA, Zhukhlistova NE, Muravieva TI, Esipov RS, Kuranova IP (2016). Three-dimensional structure of phosphoribosyl pyrophosphate synthetase from E. coli at 2.71 Å resolution. CRYSTALLOGR REP+ 61 (1), 44–54
  19. Timofeev VI, Chupova LA, Esipov RS, Kuranova IP (2015). Crystallization and preliminary X-ray diffraction study of phosphopantetheine adenylyltransferase from M. tuberculosis crystallizing in space group P3<inf>2</inf>. CRYSTALLOGR REP+ 60 (5), 682–684
  20. Fateev IV, Kharitonova MI, Antonov KV, Konstantinova ID, Stepanenko VN, Esipov RS, Seela F, Temburnikar KW, Seley-Radtke KL, Stepchenko VA, Sokolov YA, Miroshnikov AI, Mikhailopulo IA (2015). Recognition of Artificial Nucleobases by E. coli Purine Nucleoside Phosphorylase versus its Ser90Ala Mutant in the Synthesis of Base-Modified Nucleosides. Chemistry 21 (38), 13401–13419
  21. Abramchik YA, Timofeev VI, Zhukhlistova NE, Muravieva TI, Esipov RS, Kuranova IP (2015). Purification, crystallization, and preliminary X-ray diffraction study of purine nucleoside phosphorylase from E. coli. CRYSTALLOGR REP+ 60 (4), 521–524
  22. Ozhukil Kollath V, Van Den Broeck F, Fehér K, Martins JC, Luyten J, Traina K, Mullens S, Cloots R (2015). A Modular Approach to Study Protein Adsorption on Surface Modified Hydroxyapatite. Chemistry 21 (29), 10497–10505
  23. Esipov RS, Kostromina MA (2015). Comparative Analysis of the Effectiveness of C-terminal Cleavage Intein-Based Constructs in Producing a Recombinant Analog of Anophelin, an Anticoagulant from Anopheles albimanus. Appl Biochem Biotechnol 175 (5), 2468–2488
  24. Fateev IV, Antonov KV, Konstantinova ID, Muravyova TI, Seela F, Esipov RS, Miroshnikov AI, Mikhailopulo IA (2014). The chemoenzymatic synthesis of clofarabine and related 2′-deoxyfluoroarabinosyl nucleosides: The electronic and stereochemical factors determining substrate recognition by E. coli nucleoside phosphorylases. Beilstein J Org Chem 10 (0), 1657–1669
  25. Esipov R, Beyrakhova K, Likhvantseva V, Stepanova E, Stepanenko V, Kostromina M, Abramchik Y, Miroshnikov A (2012). Antiangiogenic and antivascular effects of a recombinant tumstatin-derived peptide in a corneal neovascularization model. B SOC CHIM BIOL 94 (6), 1368–1375
  26. Stepchenko VA, Seela F, Esipov RS, Miroshnikov AI, Sokolov YA, Mikhailopulo IA (2012). Enzymatic synthesis of 2-deoxy-β-d-ribonucleosides of 8-azapurines and 8-aza-7-deazapurines. Synlett 23 (10), 1541–1545
  27. Esipov RS, Stepanenko VN, Chupova LA, Miroshnikov AI (2012). Production of recombinant oxytocin through sulfitolysis of inteincontaining fusion protein. Protein Pept Lett 19 (5), 479–484
  28. Kostromina MA, Esipov RS, Miroshnikov AI (2012). Biotechnological production of recombinant analogues of hirudin-1 from Hirudo medicinalis. Russ. J. Bioorganic Chem. 38 (2), 142–151
  29. Esipov RS, Beirakhova KA, Chupova LA, Likhvantseva VG, Stepanova EV, Miroshnikov AI (2012). Recombinant fragment 44-77 of the pigment epithelium-derived factor prevents the development of the pathological cornea neovascularization. Russ. J. Bioorganic Chem. 38 (1), 64–70
  30. Kuranova IP, Smirnova EA, Abramchik YA, Chupova LA, Esipov RS, Akparov VK, Timofeev VI, Kovalchuk MV (2011). Crystal growth of phosphopantetheine adenylyltransferase, carboxypeptidase T, and thymidine phosphorylase on the international space station by the capillary counter-diffusion method. CRYSTALLOGR REP+ 56 (5), 884–891
  31. Stepanenko VN, Esipov RS, Miroshnikov AI, Andronova VL, Galegov GA, Yasko MV, Guskova AA, Skoblov AY, Skoblov YS (2011). Cloning, expression, isolation, and properties of Thymidine kinase from herpes simplex virus type 1, strain L2. Russ. J. Bioorganic Chem. 37 (4), 436–440
  32. Beyrakhova KA, Stepanenko VN, Miroshnikov AI, Esipov RS (2011). Biotechnological production of acetylated thymosin β4. Russ. J. Bioorganic Chem. 37 (2), 198–206
  33. Esipov RS, Stepanenko VN, Beyrakhova KA, Muravjeva TI, Miroshnikov AI (2010). Production of thymosin α 1 via non-enzymatic acetylation of the recombinant precursor. J Appl Biochem 56 (1), 17–25
  34. Esipov RS, Stepanenko VN, Chupova LA, Boyarskikh UA, Filipenko ML, Miroshnikov AI (2008). Production of recombinant human epidermal growth factor using Ssp dnaB mini-intein system. Protein Expr Purif 61 (1), 1–6
  35. Roivainen J, Elizarova T, Lapinjoki S, Mikhailopulo IA, Esipov RS, Miroshnikov AI (2007). An enzymatic transglycosylation of purine bases. Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids 26 (89), 905–909
  36. Stepanenko VN, Esipov RS, Gurevich AI, Chupova LA, Miroshnikov AI (2007). Recombinant oxyntomodulin. Russ. J. Bioorganic Chem. 33 (2), 227–232
  37. Panova NG, Alexeev CS, Kuzmichov AS, Shcheveleva EV, Gavryushov SA, Polyakov KM, Kritzyn AM, Mikhailov SN, Esipov RS, Miroshnikov AI (2007). Substrate specificity of Escherichia coli thymidine phosphorylase. Biochemistry (Mosc) 72 (1), 21–28
  38. Chuvikovsky DV, Esipov RS, Skoblov YS, Chupova LA, Muravyova TI, Miroshnikov AI, Lapinjoki S, Mikhailopulo IA (2006). Ribokinase from E. coli: Expression, purification, and substrate specificity. Bioorg Med Chem 14 (18), 6327–6332
  39. Esipov RS, Stepanenko VN, Gurevich AI, Chupova LA, Miroshnikov AI (2006). Production and purification of recombinant human glucagon overexpressed as intein fusion protein in Escherichia coli. Protein Pept Lett 13 (4), 343–347
  40. Konstantinova ID, Leonteva NA, Galegov GA, Ryzhova OI, Chuvikovskii DV, Antonov KV, Esipov RS, Taran SA, Verevkina KN, Feofanov SA, Miroshnikov AI (2004). Ribavirin: Biotechnological synthesis and effect on the reproduction of Vaccinia virus. Russ. J. Bioorganic Chem. 30 (6), 553–560
  41. Esipov RS, Gurevich AI, Stepanenko VN, Chupova LA, Chuvikovsky DV, Miroshnikov AI (2004). Recombinant thymosin α 1. Russ. J. Bioorganic Chem. 30 (5), 431–435
  42. Panova NG, Shcheveleva EV, Alexeev CS, Mukhortov VG, Zuev AN, Mikhailov SN, Esipov RS, Chuvikovsky DV, Miroshnikov AI (2004). Use of 4-thiouridine and 4-thiothymidine in studies on pyrimidine nucleoside phosphorylases. Mol Biol 38 (5), 770–776
  43. Antonov KV, Esipov RS, Gurevich AI, Chuvikovsky DV, Mikulinskaya GV, Feofanov SA, Miroshnikov AI (2003). Chemical and chemoenzymatic synthesis of nucleoside 5′-α- thiotriphosphates. Russ. J. Bioorganic Chem. 29 (6), 560–565
  44. Esipov RS, Chupova LA, Shvets SV, Chuvikovsky DV, Gurevich AI, Muravyova TI, Miroshnikov AI (2003). Production and purification of recombinant human oxytocin overexpressed as a hybrid protein in Escherichia coli. Protein Pept Lett 10 (4), 404–411
  45. Esipov RS, Gurevich AI, Chuvikovsky DV, Chupova LA, Muravyova TI, Miroshnikov AI (2002). Overexpression of Escherichia coli genes encoding nucleoside phosphorylases in the pET/BI21(DE3) system yields active recombinant enzymes. Protein Expr Purif 24 (1), 56–60
  46. Tikhonov RV, Pechenov SE, Gurevich AI, Esipov RS, Shvets VI, Wulfson AN (2001). Methods of Preparation of Recombinant Cytokines: IV. Renaturation of Recombinant Human Interleukin-3. Russ. J. Bioorganic Chem. 27 (1), 34–38
  47. Esipov RS, Gurevich AI, Kayushin AL, Korosteleva MD, Belova MA (1999). Dependence of the E. coli gene expression level on the structure of the translation initiation region (TIR). IV. Distal complementary TIR interactions with the mRNA coding region. Russ. J. Bioorganic Chem. 25 (7), 487–491
  48. Esipov RS, Gurevich AI, Kayushin AL, Korosteleva MD, Miroshnikov AI, Shevchenko LV, Pluzhnikov KA, Grishin EV (1997). Recombinant proteins containing amino acid sequences of two ectatomin chains. Russ. J. Bioorganic Chem. 23 (12), 839–842
  49. Gurevich AI, Esipov RS, Kachalina TA, Kayushin AL, Korosteleva MD (1997). Relation between the expression level of an Escherichia coli gene and the structure of the Transcription Initiation Region (TIR). III. Sites of complementary interaction of TIR with 16S rRNA. Russ. J. Bioorganic Chem. 23 (11), 790–795
  50. Ignatov KB, Kramarov VM, Uznadze OL, Miroshnikov AI (1997). Tth DNA polymerase-mediated amplification of DNA fragments using primers with mismatches in the 3′-region. Russ. J. Bioorganic Chem. 23 (10), 737–741
  51. Gurevich AI, Esipov RS, Kayushin AL, Korosteleva MD (1997). Synthesis of artificial genes by PCR on a synthetic template. Russ. J. Bioorganic Chem. 23 (6), 457–460
  52. Gurevich AI, Tuzova TP, Shpak ED, Starkova NN, Esipov RS, Miroshnikov AI (1996). Mode of action of a plant hormone, jasmonic acid. I. Jasmonic acid-interacting proteins that regulate transcription of the p. pinII gene from potato. Russ. J. Bioorganic Chem. 22 (2), 83–88

Есипов Роман Станиславович

  • Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 — На карте
  • ИБХ РАН, корп. 53, комн. 5607
  • Тел.: +7(495)336-68-33
  • Эл. почта: esipov@ibch.ru

Разработка способов получения аналогов тимозина-бета 4 в виде коньюгатов с увеличенным временем жизни in vivo (2017-11-28)

Разработан способ получения моноконъюгатов рекомбинантного тимозин-бета 4 (Тβ4) человека с капроновой кислотой, полисиаловой кислотой 14 кДа и полиэтиленгликолем 10 кДа. В результате многофакторных экспериментов были определены компоненты реакционной смеси и оптимизированы условия проведения данных реакций. Для каждого из аналогов разработана схема одностадийной очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ, гарантирующая достижение не менее 98% хроматографической чистоты. Результаты пептидного картирования в совокупности с хромато-масс-спектрометрическим и электрофоретическим методами анализа показали, что полученные аналоги тимозин-бета 4 являются моноконъюгатами, в которых исходный пептид модифицирован по N-концевому серину. Полученные аналоги обладают повышенной устойчивостью к деградации в плазме крови по сравнению с немодифицированным тимозином бета 4 и могут рассматриваться как перспективные кандидаты для дальнейших биологических испытаний.