Лаборатория биотехнологии гликопротеинов

Отдел биотехнологии

Руководитель: Воробьев Иван Иванович

рекомбинантные белки, эукариотические продуценты, факторы свёртываемости крови, гормоны

Основная область исследований лаборатории – разработка методических подходов к получению линий клеток яичника китайского хомячка CHO, продуцирующих фармацевтически значимые гликопротеины в больших количествах.

Разработанные в лаборатории методы позволили получить ряд клеточных линий, секретирующих факторы свертывания крови VIII и IX человека, несколько гонадотропных гетеродимерных гормонов и ряд других гликозилированных белков. В случае фолликулостимулирующего гормона человека (ФСГ) полученная лабораторией линия-продуцент была использована в полномасштабном промышленном производстве биоаналогового лекарственного препарата ФСГ Примапур.

В лаборатории разработан оригинальный ряд плазмидных векторов, позволяющих осуществлять эффективную интеграцию в эукариотический геном и амплификацию в нём генов целевых белков, а также обеспечивающих исключительно высокий уровень экспрессии целевого полипептида за счет использования некодирующей ДНК гена домашнего хозяйства китайского хомячка и фрагмента конкатемера длинного концевого повтора вируса Эппштейна-Барр. Свойства данных векторов были изучены при помощи модельных флуоресцентных белков, что позволило применять их в практических разработках наиболее рациональным образом.

Перед молекулярным клонированием гены целевых белков предварительно анализируют для выбора варианта кДНК, способного обеспечить максимальный уровень транскрипции и трансляции (подбор эффективных для клеток-продуцентов кодонов, определение оптимального количества интронов). В полученных клетках-продуцентах определяют копийность, эффективность трансляции и транскрипции целевого гена. Полученные линии-продуценты исследуют на предмет подбора оптимальных условий культивирования и стабильности. Кроме того, в лаборатории разрабатываются методы очистки целевых белков из среды культивирования, в том числе и до фармакопейных показателей.

Основные методы исследований
В рамках исследований лаборатория реализует полный цикл разработки биотехнологических методов  — от получения высокоэффективных продуцентов БАВ, до разработки методов выделения целевых белков. Данный цикл включает как традиционные, так и специальные (в том числе разработанные в лаборатории) методы и подходы.

Методы исследований:

1) анализ, оптимизация и получение генов целевых белков;

2) молекулярное клонирование, методы работы с НК (ПЦР-РВ, саузерн-блот и др.);

3) получение, культивирование и исследования эффективности и стабильности линий-продуцентов, подбор оптимальных условий для экспрессии целевых белков;

4) микроскопические методы исследования линий-продуцентов, в том числе с использованием флуоресцентных белков;

5) хроматографические методы очистки целевых белков;

6) иммунохимические методы анализа эффективности продуцентов и конечных препаратов (ИФА, вестерн-блот);

7) хроматографические методы определения содержания примесей в белковых препаратах

Краткая история лаборатории
Лаборатория была создана в 2019 году по направлению биотехнологии. Руководителем лаборатории является д.б.н. Воробьёв И.И.

1. Получение высокоэффективных продуцентов биологически активных веществ белковой природы

2. Разработка методов очистки целевых белков

3. Получение модифицированных препаратов белков пролонгированного действия

В лаборатории разработаны:

Высокоэффективные продуценты факторов свёртываемости крови VIII и IX для лечения гемофилии.

Продуцент фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) человека, широко использующегося в медицине для лечения бесплодия и при применении вспомогательных репродуктивных технологий, по показателям продуктивности значительно превосходящий известные аналоги.

Продуценты лютеинизирующего гормона человека и тиреотропного гормона.

Продуцент полноразмерного тканевого активатора плазминогена человека

Известно, что такие модификации, как пэгилирование и сиалирование способны повышать время жизни белка в крови пациентов. Поэтому в лаборатории разработан метод получения сиалированного инсулина, позволяющего значительно увеличить периоды между введениями препарата, что улучшает качество жизни пациентов. Также сотрудниками лаборатории ранее был разработан метод получения сиалированного производного пептидного гормона оксинтомодулин, синтезируемый конъюгат продемонстрировал многократное увеличение периода анорексического действия по сравнению с немодифицированным оксинтомодулином.

 

ИННОВАЦИОННЫЕ РАЗРАБОТКИ
 
Статус Наименование разработки Дата Где

Краткое описание

1 Внедрено
(Препарат зарегистрирован, выведен на рынок)
Препарат фолликулостимулирующего гормона человека (ФСГ) Примапур® (фоллитропин альфа) 2019

ООО «АйВиФарма», Москва

Рекомбинантный фолликулостимулирующий гормон человека, используется как стимулятор образования яйцеклеток в организме женщины в программах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Препарат получают в клетках китайского хомячка. В лаборатории получена линия продуцент ФСГ разработаны методы выделения, очистки и контроля качества белкового препарата.

2 Планируется к внедрению Препарат тканевого активатора плазминогена человека (альтеплазы) 2017 НПО «Микроген», Москва

Продуцент тканевого активатора плазминогена человека и способ его очистки.

 



РЕЗУЛЬТАТЫ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ
 

Регистрационный номер Тип Название Авторы Заявитель/ патентообладатель Дата приоритета

Дата публикации

1 2585532 Патент на изобретение РФ Плазмида для экспрессии рекомбинантного фактора свёртываемости крови IX человека, моноклональная линия клеток млекопитающего — продуцент рекомбинантного фактора свёртываемости крови IX человека и способ получения указанного фактора Ковнир С.В.,
Орлова Н. А.,
Воробьев И. И.,
Ходак Ю. А.,
Дронина М. А.,
Смирнов И. В.,
Пономаренко Н. А.,
Скрябин К. Г.,
Габибов А. Г..
ФИЦ Биотехнологии РАН, ИБХ РАН 31.01.2014

27.05.2016

2 2560596 Патент на изобретение РФ Плазмида для экспрессии в клетках СНО рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) человека, плазмида для экспрессии в клетках СНО бета-субъединицы рекомбинантного ФСГ человека, клетка СНО — продуцент рекомбинантного ФСГ человека и способ получения указанного гормона Воробьев И.И.,
Орлова Н.А.,
Ковнир С.В.,
Ходак Ю.А.

ООО «АйВиФарма»

24.09.2013

27.03.2015

 

Загрузка...
Загрузка...

Воробьев Иван Иванович

Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 — На карте

Загрузка...