Времяразрешенный флуоресцентный GFP-индикатор для точных измерений рН в щелочном диапазоне
Мониторинг внутриклеточного pH в живых клетках с высокой точностью в режиме реального времени представляет собой важную методологическую задачу. Большинство генетически кодируемых флуоресцентных индикаторов неспособны определить абсолютное значение рН и/или обладают узким динамическим диапазоном ответа. Сотрудники Лаборатории генетически кодируемых молекулярных инструментов ИБХ РАН изучили pH-чувствительность индикатора на основе GFP (EGFP-Y145L/S205V) и продемонстрировали, что в диапазоне pH 7,5-9,0 время жизни его флуоресценции (FL) in cellulo изменяется квазилинейным образом примерно в 3,5 раза. Учитывая относительно сильное изменение FL в узком диапазоне рН, в качестве мишени для измерения рН в живых клетках авторы предложили митохондрии, которые имеют слабощелочную среду. При помощи FLIM-микроскопии удалось определить абсолютное значение pH матрикса митохондрий и зарегистрировать сдвиг pH после стимуляции разобщителем ЭТЦ с точностью до 0,1 единицы. Работа опубликована в журнале International Journal of Molecular Sciences. Подробнее
17 ноября 2022 года