Пресс-центр / новости / Наука /

Создан генетически кодируемый флуоресцентный сенсор для измерения рН внеклеточной среды

Определение значения рН в живых клетках и тканях имеет большое значение в физиологии и клеточной биологии. Сотрудники ИБХ РАН из Лаборатории клеточной биологии рецепторов, Лаборатории молекулярной тераностики и Группы молекулярной физиологии совместно с коллегами из ИОФ им. А.М. Прохорова и МГУ имени М.В. Ломоносова создали генетически кодируемый флуоресцентный сенсор для измерения рН внеклеточной среды в слабощелочном диапазоне.

FLIM, Внеклеточный pH, Внутриклеточный pH, pH сенсор, pH, Флуоресцентные белки, SypHerExtra, SypHer3s, GFP

Григоров А.С.

Goryashchenko AS, Pakhomov AA, Ryabova AV, Romanishkin ID, Maksimov EG, Orsa AN, Serova OV, Mozhaev AA, Maksimova MA, Martynov VI, Petrenko AG, Deyev IE

Для реализации этой задачи этого был получен ряд химерных белков, представляющих собой описанный ранее рН сенсор SypHer3s с различными трансмембранными доменами: от CIRL2, ErBb2, TrkA, IR и нейрексина-1. Среди этих белков слияния только вариант с трансмембранным доменом нейрексина-1 оказался локализованным на клеточной мембране. Данный белок был назван SypHerExtra. Было показано, что при возбуждении на 445 нм время жизни флуоресценции как SypHer3s, так и SypHerExtra зависит от значения рН. С помощью метода конфокальной микроскопии с временным разрешением (fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM) на живых опухолевых клетках было продемонстрировано, что SypHerExtra можно успешно использовать для определения внеклеточного рН, в то время как SypHer3s можно применять для измерения внутриклеточного рН. Таким образом, эти два сенсора подходят для количественных измерений внутриклеточного и внеклеточного рН в диапазоне от 7,5 до 9,5 в различных биологических системах с использованием метода FLIM.

Результаты данной работы опубликованы в журнале Biosensors.

14 декабря 2021 года