Пресс-центр / новости / Наука /
Информация о ходе выполнения проекта Минобрнауки России по Соглашению № 14.607.21.0062 о предоставлении субсидии от 23 сентября 2014 г. по теме «Создание терапевтических бифункциональных агентов на основе одноцепочечных антител для элиминации раковых
За отчетный период 2-го этапа в рамках выполнения соглашения были проведены следующие работы:
произведен забор генетического материала иммунизированных альпак, содержащего периферические В-лимфоциты, путем резекции периферического лимфоузла;
получены библиотеки фрагментов вариабельных частей антител;
на основе библиотеки фрагментов вариабельных частей антител созданы фаговая и РНК-библиотеки фрагментов;
поставлены фаговый и рибосомный дисплеи для проведения in vitro селекции и обогащения библиотек наиболее аффинными фрагментами VHH-антител;
получена наивная библиотека фрагментов VHH-антител из генетического материала альпак (костного мозга неонатального животного);
синтезированы праймеры и нуклеотидные последовательности, необходимые для амплификации и функционирования библиотек фрагментов VHH-антител в составе фаговой и РНК-библиотек;
произведен контроль сложности библиотек фрагментов VHH-антител путем выборочного секвенирования индивидуальных клонов.
В результате выполнения работ второго этапа работ по Соглашению № 14.607.21.0062 о предоставлении субсидии получены нижеследующие основные результаты.
1. Путем резекции периферического лимфатического узла у альпак был произведен забор генетического материала, содержащего периферические В-лимфоциты, из которого далее была получена мРНК в препаративных количествах. Параллельно был произведен забор крови для получения сыворотки с последующим выделением иммуноглобулинов G и VHH-антител, а также фракции мононуклеарных клеток периферической крови, как альтернативного источника генетического материала для создания библиотек фрагментов вариабельных частей антител.
2. Из каждого препарата мРНК были созданы библиотеки вариабельных частей антител альпак, контроль качества которых осуществлялся электрофоретическим методом.
3. На основе полученных библиотек фрагментов VHH-антител были созданы фаговые и РНК-библиотеки фрагментов путем либо клонирования их в фагмиду (для получения фаговой библиотеки), либо постановкой реакции in vitro транскрипции (для РНК-библиотеки).
4. Обогащение библиотек наиболее аффинными фрагментами VHH-антител было достигнуто проведением нескольких раундов in vitro селекции с помощью фагового и рибосомного дисплеев.
5. Параллельно из генетического материала альпак (костного мозга неонатального животного) была получена наивная библиотека фрагментов VHH-антител.
6. Cинтезированы праймеры и нуклеотидные последовательности, необходимые для амплификации и функционирования библиотек фрагментов VHH-антител в составе фаговой и РНК-библиотек.
7. Произведен контроль сложности библиотек фрагментов VHH-антител путем выборочного секвенирования индивидуальных клонов. Сравнение аминокислотных последовательностей подтвердило, что полученные библиотеки VHH фрагментов обладают хорошей вариабельностью. В каждом из секвенированных клонов существует своя последовательность в области гипервариабельных участков. Консенсусные области, или так называемые каркасные области, наоборот практически не подверглись дивергенции.
Все задачи второго этапа работ выполнены в установленные сроки в соответствии с планом-графиком исполнения обязательств и условиями технического задания Соглашения № 14.607.21.0062 о предоставлении субсидии от 23 сентября 2014 г.
8 июля 2015 года